【大鼠小鼠Morris水迷宫巴恩斯旷场跑台训练实验外包服务】
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在非临床有效性研究过程中,主要采用行为学试验研究药物对动物学习记忆功能的影响。人和动物的内部心理过程是无法直接观察到的,只能根据可观察到的刺激反应来推测脑内发生的过程,对脑内记忆过程的研究只能从人类或动物学习或执行某项任务后间隔一定时间,测量他们的操作成绩或反应时间来衡量这些过程的编码形式、贮存量、保持时间和它们所依赖的条件等等。小鼠/大鼠迷宫实验则是有效的实验技术。
(一) 大鼠小鼠Morris水迷宫行为学实验技术服务概述、目的
Morris水迷宫是英国心理学家Morris于20世纪80年(1981)代初设计并应用于脑学习记忆机制研究的一种实验手段,其在AD研究中的应用非常普遍。
大鼠小鼠Morris水迷宫实验技术服务实验目的
检测动物的空间记忆和探索能力。
(二) 大鼠小鼠Morris水迷宫行为学实验技术服务原理
大(小)鼠虽然天生会游泳,但是它们性喜干燥,厌恶潮湿,同时游泳对于其而言是十分消耗体力的活动,因此它们会本能地寻找水中的休息场所。寻找休息场所的行为涉及一个复杂的记忆过程,包括收集与空间定位有关的视觉信息,再对这些信息进行处理、整理、记忆、加固,然后再取出,目的是能成功地“航行”并且找到隐藏在水中的站台,最终从水中逃脱。
(三)大鼠小鼠Morris水迷宫行为学实验技术服务材料与方法
(a)实验材料
1.实验设备 Morris水迷宫。
2.实验动物及分组
(1)大鼠或小鼠(本实验以大鼠为例)。
(2)根据实验目的将大鼠分组,并将每只大鼠编号。
(3)分笼饲养,自由饮食,动物房温度21~25℃,相对湿度40%~60%,自然光照昼夜节律变化。
(b)实验具体方法
将各组大鼠在正式训练前一天分别放入水中自由游泳2min,使其熟悉水迷宫环境。然后对各组大鼠正式进行Morris水迷宫测试。实验采用航行定位实验和空间探索实验分别测试大鼠的学习能力和记忆能力。
1.定位航行实验共5d 将大鼠从标记的4个入水点依次朝向池壁轻轻放入水中,采集大鼠在2min内寻找到并爬上平台所用的时间(平台在第3象限,平台低于水位2cm左右),即逃避潜伏期(在站台上稳定10s算找到站台,否则继续记录)。如果大鼠2min内未找到平台,需将其牵引到平台,并停留60s,这时潜伏期记为2min。
2.空间探索实验1d 撤除平台,将大鼠放入水池中,记录大鼠在2min内在平台所放置的目标象限停留时间和穿越平台所在区域的次数。
(c)实验操作中的注意事项
(1)在开始实验前,实验者应与受试动物建立良好的感情,让动物熟悉实验者的身体信息,如气味、相貌等。捕捉动物的动作要温柔,忌讳手抓鼠尾,以免过分刺激动物。鼠的嗅觉很敏感的,在实验过程中应当避免使用较强气味的化妆品或香水。另外。如果大鼠能够看到实验者,在水迷宫实验过程中,实验者要躲藏或者保持固定位置,避免造成大鼠能够看到人体移动。
(2)水池不能太小,站台也不能太大,水池太小或站台太大都会增加大鼠随机上台的概率,出现假阳性结果。目前大鼠水迷宫的直径大多为1.2m或1.6m,本实验所采用的直径是1.6m。
(3)水温对逃避潜伏期影响很大:如果温度过高,大鼠游几次后渐渐适应迷宫环境,就把迷宫当成“浴盆”,在泳池中漂浮不动;如果温度过低,大鼠体温下降很快,体力也会耗散太多,不能坚持很久,就会出现游几次潜伏期突然增大的现象。所以要保证水温在23~25℃。
(4)要保证水迷宫水面上没有光影,主要是避免光线在水面的反射,以免留在水面的光照影子被软件的采集系统混淆为大鼠的影子,影响最终自动分析大鼠中心点。将屋子里的灯都关掉,窗帘都拉上,切断光源。
(5)尽量保证实验室内所有大鼠能够看到的外参在实验过程中都要位置固定。
(6)大鼠训练完成后要用干布擦拭。并用烤炉烤干。
(四) 大鼠小鼠Morris水迷宫行为学实验技术服务实验方法
分获得性训练、探查和对位训练3个过程。
1.获得性训练(Acquisition phase)理论上将水池分为4个象限,平台置于其中一个象限区的中央。
(1) 将动物(大鼠或小鼠)头朝池壁放入水中,放入位置随机取东、西、南、北四个起始位置之一。记录动物找到水下平台的时间(s)。在前几次训练中,如果这个时间超过60s,则引导动物到平台。让动物在平台上停留10s.
(2) 将动物移开、擦干。必要时将动物(尤其是大鼠)放在150W的白炽灯下烤5min,放回笼内。每只动物每天训练4次,两次训练之间间隔15~20min,连续训练5d。
2.探查训练(probe trial 1)最后一次获得性训练结束后的第二天,将平台撤除,开始60s的探查训练。将动物由原先平台象限的对侧放入水中。记录动物在目标象限(原先放置平台的象限)所花的时间和进入该象限的次数,以此作为空间记忆的检测指标。
3.对位训练(reveral phase)测定动物的工作记忆(working memory)。探查训练结束后的第二天,开始维持4天的对位训练。将平台放在原先平台所在象限的对侧象限,方法与获得性训练相同。每天训练4次。每次记录找到平台的时间和游泳距离以及游泳速度。
4.对位探查训练(probe trial 2)最后一次对位训练的第二天进行。方法与上述探查训练类似。记录动物60s内动物在目标象限(平台第二次所在区)所花时间和进入该区的次数。
大鼠小鼠Morris水迷宫行为学实验技术服务是一种强迫实验动物(大鼠、小鼠)游泳,学习寻找隐藏在水中的平台的一种实验,主要用于测试实验动物对空间位置觉和方向觉(空间定位)的学习记忆能力。它广泛应用于学习记忆、阿尔茨海默病、海马和外海马、智力与衰老、新药开发/筛选/评价、药理学、毒理学、预防医学、神经生物学、动物心理学、行为生物学及时辰生物学等多个学科的科学研究和计算机辅助教学(CAI)。
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